精子（spermatozoa）分析提供了精子生成（spermatogenesis）、精子壽命、以及生育能力的基礎(chǔ)信息。其中精子的活力（vitality）、運(yùn)動(dòng)能力（motility）、授精潛力（fertilizing potential）、膜結(jié)構(gòu)或染色質(zhì)結(jié)構(gòu)完整性（integrity）、頂體反應(yīng)（acrosomal reaction）功能的評(píng)價(jià)是精子分析的重要指標(biāo)，也是決定人工受孕或體外授精（in vitro fertilization；IVF）的重要參數(shù)。其中質(zhì)膜完整性（membrane integrity）是精子授精能力的標(biāo)志，反映精子膜功能狀態(tài)。結(jié)構(gòu)完整和功能活化的質(zhì)膜是精子細(xì)胞代謝、獲能頂體反應(yīng)、附著和穿越卵細(xì)胞等生理活動(dòng)所必需的。使用SYBR14和碘化丙啶（Propidium Iodide；PI）雙重?zé)晒馊旧?，是精子質(zhì)膜完整性分析的最常用的方法。首先使用SYBR14染色，基于其可以自由穿越活體且質(zhì)膜完好的精子細(xì)胞，與核內(nèi)核酸結(jié)合的特點(diǎn)，顯示質(zhì)膜完整性。而碘化丙啶受到質(zhì)膜完整的活體精子細(xì)胞（包括游動(dòng)性和非游動(dòng)性精子）的排斥，而容易進(jìn)入破損或死亡精子細(xì)胞，表明質(zhì)膜損傷。雙染的作用，以幫助區(qū)分質(zhì)膜結(jié)構(gòu)完整性與否。通過(guò)常用的熒光顯微鏡，便可清晰觀察到質(zhì)膜狀態(tài)（status）。  
產(chǎn)品內(nèi)容
HEPENGBIO保存液（Reagent A）  毫升
HEPENGBIO染色液A（Reagent B）  微升
HEPENGBIO染色液B（Reagent C）  微升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)  1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里；HEPENGBIO染色液A和B（Reagent B和C）避免光照，有效保證6月
用戶(hù)自備
1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器
微型臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品染色操作的容器
血細(xì)胞計(jì)數(shù)器：用于細(xì)胞計(jì)數(shù)
載玻片和蓋玻片：用于精子細(xì)胞爬片
（共聚焦）熒光顯微鏡：用于觀察染色的精子細(xì)胞  
實(shí)驗(yàn)步驟
1． 移取新鮮獲得的1毫升精液（48小時(shí)內(nèi)）到1.5毫升離心管
2． 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱孵育30分鐘
3． 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為600g
4． 小心抽去上清液
5． 加入xx毫升HEPENGBIO保存液（Reagent A），混勻顆粒群
6． 在血細(xì)胞計(jì)數(shù)器上進(jìn)行精子細(xì)胞計(jì)數(shù)，并調(diào)整到2 X 10⁷精子細(xì)胞/毫升
7． 移取100微升精子細(xì)胞到新的1.5毫升離心管
8． 加入xx微升HEPENGBIO染色液A（Reagent B），混勻
9． 37℃溫度下孵育10分鐘，避免光照
10． 小心加入xx微升HEPENGBIO染色液B（Reagent E），混勻
11． 37℃溫度下孵育10分鐘，避免光照
12． 移取50微升到載玻片上
13． 小心抽去染色液
14． 蓋上蓋玻片
15． 即刻在（共聚焦）熒光顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)（注意：每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)精子）
觀察綠色熒光—HEPENGBIO染色液B（Reagent E）：濾波器激發(fā)波長(zhǎng)490nm，散發(fā)波長(zhǎng)520nm
觀察紅色熒光—HEPENGBIO染色液A（Reagent B）：濾波器激發(fā)波長(zhǎng)：488nm；散發(fā)波長(zhǎng)：630nm 
16． 分析結(jié)果

分類(lèi)	染色結(jié)果	意義
I	整個(gè)精子頭部呈現(xiàn)明亮綠色熒光	質(zhì)膜完整（intact）
II	整個(gè)或部分精子頭部呈現(xiàn)紅色熒光	質(zhì)膜完全損傷（damaged）
III	整個(gè)精子頭部呈現(xiàn)橘黃色熒光	質(zhì)膜損傷

 
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為20次操作
2． 操作時(shí)須戴手套
3． 樣品檢測(cè)前，建議在血細(xì)胞計(jì)數(shù)器上進(jìn)行精子細(xì)胞計(jì)數(shù)
4． 精子細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)乘上稀釋倍數(shù)10⁴。標(biāo)準(zhǔn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)器（Hemocytometer）的計(jì)算方法是：
1毫米方塊的細(xì)胞計(jì)數(shù)X 10⁴（稀釋倍數(shù)）＝實(shí)際細(xì)胞數(shù)/毫升
5． 染色完成后，即刻進(jìn)行檢測(cè)分析
6． 本公司提供系列發(fā)育生物學(xué)相關(guān)檢測(cè)試劑產(chǎn)品